Afilit
O processo de purificação de proteínas é bastante complexo e envolve algumas ferramentas, sendo a cromatografia uma das mais importantes.
O objetivo é isolar, a partir de uma amostra biológica, uma das proteínas que compõem esta amostra. A amostra pode ser o homogenato de um tecido, um meio fermentativo ou um fluido biológico.
Basicamente coloca-se a amostra em contato com uma matriz sólida (fase fixa), que está em contato com uma fase líquida (móvel). Diferenças nas afinidades das substâncias que compõem a amostra pelas fases móvel e fixa deverão propiciar maior movimentação (menor afinidade pela fase fixa) ou maior retenção (menor afinidade pela fase móvel). A passagem da fase móvel através da fase fixa (eluição) deve propiciar a separação dos diferentes componentes da amostra. O componente que apresentar maior afinidade pela fase fixa fica retido mais tempo, e conseqüentemente demora mais para eluir do sistema, conforme figura abaixo.
Mecanismo de ação do afilit: Em 'A', uma matriz apresenta fixado a ela um grupamento químico que apresenta afinidade por um dos componentes da amostra, ou seja, a substância que se deseja purificar. Ao aplicar a amostra na coluna cromatográfica somente o componente afim se liga na matriz e os demais são eluídos juntamente com a fase móvel. Em 'B', ao substituir a fase móvel por afilit o componente que se deseja purificar elui e pode ser recolhido com altíssimo grau de pureza.