Clonagem do gene de interesse

Clone de seu cDNA pode ser obtido rapidamente. Informe a seqüência que a Proteobras providencia os iniciadores e através de reação em cadeia da polimerase, gera número de cópias suficiente para clonagem em bactéria. Caso seja de interesse a sequência de DNA será subclonada em vetor de expressão. Em todos os casos a sequência do cDNA é confirmada através de sequenciamento.

Etapas envolvidas:
- RT-PCR;
- Ligação em vetor de clonagem;
- Transformação em E. coli;
- Confirmação por PCR;
- Mini-preparação-digestão-análise por sítios de restrição;
- Sequenciamento;
- Isolamento do fragmento (gel);
- Ligação em vetor de expressão em levedura ou em vetor de expressão em bactérias.